细胞膜动态过程的完整可视化系统

卡尔蔡司介绍了用于细胞和分子生物学的激光全内反射荧光成像系统。随着TIRF的引入，对活细胞膜附近或无细胞系统盖滑移上的动态过程的检查才成为可能。在过去，这一过程在技术上非常复杂，对激光束的对准非常敏感，也就是说，只有少数用户可以使用。得益于TIRF成像系统的模块化设计，卡尔蔡司已将新技术提供给大量用户。

例如，观察蛋白质在转运过程中的动态行为，或在分子水平上的胞吞和胞出，在成像过程中需要高的空间和时间分辨率。还需要与其他观察技术和孵化可能性相结合，以确保在稳定的位置进行长时间的观察。

与卡尔蔡司的Axiovert 200倒置研究显微镜一起使用的激光TIRF成像系统是第一个通过快速双滤光轮和TIRF和透射光对比技术(DIC /明亮场)的组合提供激光线的快速变化，使AxioVision软件能够每秒连续记录两对图像。卡尔蔡司是唯一一家提供将多色TIRF、外显荧光和透射光对比技术(DIC)与样品在激光安全条件下孵育相结合的可能性的制造商。样品在激光安全条件下的培养现在可以用所有阶段版本(固定，加热，机械和扫描阶段)。扫描阶段的特殊好处包括更高的长期稳定性和更精确的标本定位。对于多色TIRF，可使用波长为458、488和514nm的100 mW多线氩激光器。由于光学设计，TIRF效应实现了所有三个波长与单一角度设置。波长或标本改变后不需要重新排列。这三条激光线适用于大多数活性染料，如荧光蛋白CFP, GFP, YFP和mRFP。一个新功能是基于AxioVision软件4.5版本的TIRF对准发散和TIRF角度辅助，允许非常容易的屏幕对准，而不影响激光安全。

与传统的宽视场荧光不同，TIRF提供了非常高的轴向分辨率，因为激发场只穿透到样品的100 ~ 200nm。结构可以被激发，因此只能在这个体积中可视化。背景荧光干扰已经成为过去。TIRF和共聚焦激光扫描显微镜的主要区别是，共聚焦切片的典型厚度为400 ~ 1000nm，而TIRF方法产生的切片厚度约为。150海里。因此，只有TIRF允许产生从标本到覆盖层滑移(即细胞膜)的过渡所需的分辨率，以使单细胞的动态过程可视化。