RP或NP条件下磷酰胺的HPLC分析

最大的灵活性与YMC-Triart

合成寡核苷酸是非常有前途的候选生物制药在广泛的疾病。这就是为什么沉默RNA (siRNA)、信使RNA (mRNA)和反义寡核苷酸(ASOs)等核酸疗法在当前的研究中得到了相当大的关注。

磷酰胺是寡核苷酸、核苷酸短片段和类似物化学合成的重要组成部分。为了防止在寡核苷酸合成过程中残留的反应位点如羟基和氨基上发生任何副反应，必须保护这些基团。因此，高活性的原生核苷酸被修饰成四种不同的保护基团。图1显示了使用以腺苷为基的磷酸酰胺为例的保护组。

在化学寡核苷酸合成过程中，可能会发生错误，这就是为什么需要密切监测磷酰胺的纯度。在一个新申请须知两种不同的分离模式-反相(RP)和正相(NP) -用于分析四种不同的磷酸酰胺。由于这些分子的复杂性，可以使用不同的相互作用来实现合理的保留和分辨率。由于磷酰胺在磷原子上有一个手性中心，因此存在两个异构体，从而在色谱图中出现双峰。

所有分离都使用高鲁棒性进行YMC-Triart列是现代生物色谱应用的理想选择。对于RP分离，使用了YMC-Triart C18色谱柱，结果产生了尖锐的峰。YMC-Triart SIL是含有三乙胺作为添加剂的流动相(图2中的例子)。对所有化合物都获得了良好的分辨率。